Качество ПЦР-смеси проявляется не в первой постановке. В первой всё работает, даже если вы смешали компоненты на коленке из трёх разных наборов. Разница вылезает на десятой аликвоте, которую достали из морозилки через месяц после вскрытия. Или когда партию реагента привезли в термосумке, которая провела восемь часов в багажнике фургона на тридцатиградусной жаре. Или когда новый лаборант раскапывает планшет медленнее, чем обычно, и смесь стоит в открытых пробирках лишние полчаса. Именно в эти моменты становится понятно, из чего сделан мастер-микс: из фермента, который держит активность в широком диапазоне условий, или из компромисса между ценой и стабильностью.

Мы сделали две линейки, чтобы закрыть оба сценария. BioМастер - классические жидкие смеси для лабораторий с отлаженной логистикой, бесперебойными морозильниками и предсказуемым графиком работы. LyoМастер - лиофилизованные смеси для полевых лабораторий, мобильных ПЦР-боксов, выездных бригад и всех, кто хотя бы раз терял набор из-за отказавшего на выходные холодильника. Лиофилизат хранится при комнатной температуре, восстанавливается за минуту и после этого работает так же, как свежеразведённый жидкий мастер-микс.

Что конкретно в разделе
BioМастер ОТ-ПЦР-РВ (2×). Жидкая смесь для одношаговой обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени с флуоресцентными зондами. Добавляете праймеры, зонды и образец - всё, больше ничего не нужно. Обратная транскриптаза и Taq-полимераза уже в пробирке, буфер подобран так, чтобы обе реакции шли последовательно без смены условий. Работает с зондами FAM, HEX, ROX, Cy5. Для лабораторий, которые рутинно ставят ОТ-ПЦР на вирусные мишени и не хотят возиться с раздельными этапами.

BioМастер ОТ-ПЦР SYBR Blue (2×). То же самое, но для детекции по SYBR Green. Если вы работаете без зондов, с интеркалирующим красителем, это ваш вариант. Одношаговый протокол, обратная транскрипция и амплификация в одной пробирке. Подходит для количественного анализа, если праймеры хорошо подобраны и не дают димеров. Кривая плавления в конце цикла позволит отличить целевой продукт от неспецифики.

LyoМастер HS-qPCR. Лиофилизованная смесь для ПЦР в реальном времени с флуоресцентными зондами. Hot start. Фермент активируется только после прогрева, так что неспецифическое связывание праймеров при комнатной температуре исключено. Это важно, когда работаете с большим количеством образцов и планшет раскапывается долго. Лиофилизат не боится транспортировки без холода и хранения при плюс 25. Перед постановкой просто добавляете воду, праймеры, зонды и пробу.

LyoМастер HS-qPCR SYBR Blue. Та же история, но под SYBR Green. Лиофилизованный формат, горячий старт, количественная ПЦР. Удобно для лабораторий, у которых нет выделенной холодной комнаты или которые работают в полевых условиях, где морозильник - это термосумка с хладагентами.

LyoМастер HS-Taq ПЦР (2×). Классическая ПЦР с детекцией по конечной точке, не в реальном времени. Лиофилизованная смесь с Taq-полимеразой горячего старта. В комплекте отдельно идут хлорид магния и буфер для нанесения на гель. Для тех, кто до сих пор гоняет ПЦР с гель-электрофорезом и не планирует переходить на real-time. Или для задач, где количественная детекция не нужна, а нужен просто ответ «есть продукт / нет продукта».

LyoМастер ОТ-ПЦР-РВ. Лиофилизованная смесь для одношаговой ОТ-ПЦР с зондами. Все компоненты, включая ферменты и обработанную ДЭПК воду, уже внутри лиофилизата. Восстановили, добавили праймеры, зонды, образец - запустили. Для лабораторий, которые хотят совместить удобство одношагового протокола с термостабильностью лиофилизованной формы.

Лиофилизация: зачем это нужно на практике
Обычный жидкий мастер-микс нужно хранить при минус двадцати. Перевозить в термоконтейнере с сухим льдом. При длительном хранении активность фермента падает, и к концу срока годности вы рискуете получить сдвиг порогового цикла на пару единиц. Лиофилизат решает все эти проблемы разом. Он высушен под вакуумом до состояния пористого порошка и запаян во флакон в атмосфере инертного газа. Ферменты в таком виде спят и не деградируют. При комнатной температуре лиофилизат стабилен месяцами, в холодильнике - год и больше. Для хозяйств, которые заказывают реагенты раз в сезон и хранят их до следующей диагностической кампании, это единственно разумный вариант. Для мобильных лабораторий, работающих на выезде, - безальтернативный.

Как выбирать
Определитесь с форматом детекции. Если работаете с зондами - вам нужны смеси с пометкой «РВ» или «HS-qPCR». Если с SYBR Green - ищите «SYBR Blue». Определитесь с форматом поставки. Если лаборатория стационарная, с надёжными морозильниками и предсказуемым расходом - берите BioМастер, он дешевле за реакцию. Если бывают перебои с электричеством, вы ездите на отбор проб за триста километров от базы или закупаете реагенты раз в полгода с запасом - ваш выбор LyoМастер. Разница в цене отобьётся на первой же партии, которая не испортилась из-за отказавшего морозильника на выходных.
И ещё: не пытайтесь разводить лиофилизат водой сомнительного качества. Берите воду для ПЦР из проверенного источника или ту, что идёт в комплекте с набором. Лиофилизат восстановится в любой воде, но если в ней есть нуклеазы или ингибиторы, результат вас не порадует. Экономия на воде для ПЦР - самая дорогая экономия в лабораторной практике.

Кому
Клинико-диагностическим лабораториям. Ветеринарным центрам. Фитосанитарным станциям. Полевым микробиологическим группам. Научным лабораториям в университетах и НИИ. Всем, кто ставит ПЦР руками и хочет, чтобы реакция работала с первой постановки, а не с четвёртой. И всем, кто понимает, что реагент - это не расходник, на котором экономят. Это то, от чего зависит, увидят вы патоген в пробе или пропустите его. А цена пропущенного патогена всегда выше цены мастер-микса. На порядки выше.